렘데시비르 Remdesivir와 클로로퀸 chloroquine은 최근에 등장한 새로운 코로나 바이러스 (2019-nCoV)를 체외에서 효과적으로 억제합니다.

https://www.nature.com/articles/s41422-020-0282-0

Remdesivir와 chloroquine은 최근에 등장한 새로운 코로나 바이러스 (2019-nCoV)를 체외에서 효과적으로 억제합니다.

• 맨리 왕 ,
• Ruiyuan Cao ,
• Leike Zhang ,
• 양 싱루 ,
• 지아 리우 ,
• 민규에 ,
• 정리시 ,
• Zhihong Hu ,
• 우종 &
• 징푸 샤오

세포 연구 볼륨 30 , 페이지269 - (271) ( 2020 ) 이 기사를 인용

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친애하는 편집자에게,
2019 년 12 월, 이전에 알려지지 않은 병원체로 인한 새로운 폐렴이 중국 중부 1,100 만 명의 도시인 우한에서 나타났습니다. 초기 사례는 무한의 해산물 시장 노출과 관련이 있습니다. 1 2020 년 1 월 27 일 현재, 중국 당국은 81 건의 사망을 포함 해 중국 대륙에서 2835 건의 확인 된 사례를보고했다. 또한 홍콩, 마카오, 대만에서 19 건의 확인 된 사례가 확인되었으며 태국, 일본, 한국, 미국, 베트남, 싱가포르, 네팔, 프랑스, 호주 및 캐나다에서 39 건의 수입 사례가 확인되었습니다. 병원체는 곧 급성 코로나 바이러스 (2019-nCoV)로 확인되었으며, 이는 심각한 급성 호흡기 증후군 CoV (SARS-CoV)와 밀접한 관련이 있습니다. 2현재 새 바이러스에 대한 특정 치료법은 없습니다. 따라서, 질병을 퇴치하기위한 효과적인 항 바이러스제를 식별하는 것이 시급하다.

약물 발견에 대한 효율적인 접근법은 기존 항 바이러스 약물이 관련 바이러스 감염을 치료하는 데 효과적인지 테스트하는 것입니다. 2019-nCoV가 속한 Betacoronavirus 또한 SARS-COV 중동 호흡기 증후군 COV (MERS-COV)이 포함되어 있습니다. SARS 또는 MERS 환자에게는 ribavirin, interferon, lopinavir-ritonavir, corticosteroids와 같은 몇 가지 약물이 사용되었지만 일부 약물의 효능은 여전히 논란의 여지가 있습니다. 3 이 연구에서 우리는 ribavirin, penciclovir, nitazoxanide, nafamostat, chloroquine 및 2 개의 잘 알려진 광범위 항 바이러스 약물 remdesivir (GS-5734) 및 favipiravir (T-705)를 포함한 FAD 승인 약물 5 가지의 항 바이러스 효율을 평가했습니다. 시험 관내 2019-nCoV의 임상 분리 물.

2019-nCoV의 세포 독성, 바이러스 수율 및 감염률에 대한 이들 화합물의 효과를 측정하기 위해 표준 분석을 수행 하였다. 먼저, Vero E6 세포 (ATCC-1586)에서 후보 화합물의 세포 독성을 CCK8 분석에 의해 결정 하였다. 그런 다음 Vero E6 세포는 nCoV-2019BetaCoV / Wuhan / WIV04 / 2019 2에 감염되었습니다.다양한 농도의 시험 약물의 존재 하에서 0.05의 다중 감염 (MOI) 0.05에서. DMSO를 대조군에 사용 하였다. 효능은 정량적 실시간 RT-PCR (qRT-PCR)을 통해 세포 상청액에서의 바이러스 카피 수의 정량화에 의해 평가되었고 감염 48 시간 후 (pi) (pi)에서 면역 형광 현미경 법을 통해 바이러스 핵 단백질 (NP) 발현의 가시화 (cytopathic)로 확인되었다. 감염 시점에서 효과는 명확하지 않았다). 시험 된 7 가지 약물 중, 리바비린 (반 최대 유효 농도 (EC 50 ) = 109.50 μM, 반세포 독성 농도 (CC 50 )> 400 μM, 선택성 지수 (SI)> 3.65), 펜 실로 비르를 포함한 고농도의 3 개의 뉴 클레오 시드 유사체 (EC 50  = 95.96 μM, CC 50 바이러스 감염을 감소시키기 위해서는  > 400 μM, SI> 4.17) 및 favipiravir (EC 50  = 61.88 μM, CC 50 > 400 μM, SI> 6.46)가 필요 하였다 (도 1a 및 보충 정보,도 S1 ). 그러나, favipiravir는 에볼라 바이러스 챌린지로부터 마우스를 보호하는데 100 % 효과적인 것으로 나타 났지만, Vero E6 세포에서 의 EC 50 값은 67 μM만큼 높았 지만 , 4 이 항 바이러스 뉴 클레오 사이드를 평가하기 위해 생체 내 연구가 더 권장 됨을 시사한다. 막 융합을 방지하는 MERS-CoV의 강력한 억제제 인 나파 모 스타트는 2019-nCoV 감염에 대해 억제 적이었다 (EC 50  = 22.50 μM, CC 50 > 100 μM, SI> 4.44). 인간 및 동물 코로나 바이러스를 포함하여 광범위한 바이러스에 대한 항 바이러스 가능성을 갖는 상업적 항원 충제 인 Nitazoxanide는 낮은 마이크로 몰 농도에서 2019-nCoV를 억제했습니다 (EC 50  = 2.12 μM; CC 50  > 35.53 μM; SI> 16.76) . 2019-nCoV 감염에 대한이 약물의 추가 생체 내 평가가 권장됩니다. 특히, 두 화합물 remdesivir (EC 50  = 0.77 μM; CC 50  > 100 μM; SI> 129.87)와 클로로퀸 (EC 50  = 1.13 μM; CC 50  > 100 μM, SI> 88.50)은 저 마이크로 몰 농도에서 바이러스 감염을 강력하게 차단했습니다. 높은 SI를 보여 주었다 (도 1a, b ).

도 1 : 시험 관내 2019-nCoV에 대한 시험 약물의 항 바이러스 활성.

베로 E6 세포를 48 시간 동안 지시 된 항 바이러스제의 다른 투여 량의 치료에 0.05의 MOI에서 2,019 - nCoV 감염시켰다. 이어서 세포 상청액에서의 바이러스 수율을 qRT-PCR에 의해 정량화 하였다. Vero E6 세포에 대한 이들 약물의 세포 독성은 CCK-8 분석에 의해 측정되었다. 그래프 의 좌측 및 우측 Y 축은 각각 약물의 바이러스 수율 및 세포 독성의 평균 % 억제를 나타낸다. 실험은 3 회 수행되었다. b 렘 세시 비르 및 클로로퀸의 치료시 바이러스 감염의 면역 형광 현미경. 바이러스 감염 및 약물 치료는 상기 언급 된 바와 같이 수행되었다. 48 시간에 감염된 세포를 고정시킨 후, 박쥐 SARS 관련 CoV 2 의 NP에 대해 토끼 혈청으로 조사 하였다.1 차 항체로서 및 각각 2 차 항체로서 Alexa 488- 표지 된 염소 항-토끼 IgG (1 : 500; Abcam). 핵은 Hoechst 염료로 염색되었다. 바, 100 μm. c 와 d레메 데시 비르 및 클로로퀸의 첨가 시간 실험. "Full-time"치료를 위해, Vero E6 세포를 약물로 1 시간 동안 전처리 한 후, 바이러스를 첨가하여 2 시간 동안 부착시켰다. 그 후, 바이러스-약물 혼합물을 제거하고, 세포는 실험이 끝날 때까지 약물 함유 배지로 배양 하였다. "엔트리"치료를 위해, 약물을 바이러스 부착 전에 1 시간 동안 세포에 첨가하고, 2 시간에 바이러스-약물 혼합물을 새로운 배양 배지로 교체하고 실험이 끝날 때까지 유지시켰다. "입장 후"실험의 경우, 약물을 2 시간에 첨가하고 실험이 끝날 때까지 유지 하였다. 모든 실험 그룹에 대해, 세포를 0.05의 MOI에서 2019-nCoV로 감염시키고, 감염된 세포 상청액에서의 바이러스 수율을 qRT-PCR c에 의해 정량화 하였다감염된 세포에서의 NP 발현 을 14 시간 pi에서 웨스턴 블롯 d 에 의해 분석 하였다

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Remdesivir는 최근 배양 된 세포, 생쥐 및 비인간 영장류 (NHP) 모델 에서 광범위한 RNA 바이러스 (SARS / MERS-CoV 5 포함 ) 감염에 대한 유망한 항 바이러스 약물로 인식되고 있습니다. 현재 에볼라 바이러스 감염 치료를위한 임상 개발 중입니다. 6 Remdesivir는 아데노신 유사체로, 초기 바이러스 RNA 사슬에 통합되어 조기 조기 종결됩니다. 7 우리의 첨가 시간 분석은 바이러스 도입 단계에서 레 메데 비르가 기능하는 것을 보여 주었다 (도 1c, d), 이는 뉴클레오티드 유사체로서의 추정 적 항 바이러스 메커니즘과 일치한다. 워렌 (Warren) 등. NHP 모델에서, 10 mg / kg 용량의 렘 세시 비어의 정맥 내 투여는 혈액에서 활성 형태의 수반되는 지속적인 수준의 결과 (10 μM)를 나타내고 에볼라 바이러스 감염에 대해 100 % 보호를 부여 함을 보여 주었다. 7 우리의 데이터는 Vero E6 세포에서 2019-nCoV에 대한 remdesivir의 EC 90 값이 1.76 μM였으며, 이는 작업 농도가 NHP에서 달성 될 수 있음을 시사합니다. 우리의 예비 데이터 (보충 정보, 그림 S2 )는 remdesivir가 2019-nCoV에 민감한 인간 세포주 (인간 간암 Huh-7 세포)에서 바이러스 감염을 효율적으로 억제한다는 것을 보여주었습니다. 2

광범위하게 사용되는 항 말라리아 및자가 면역 질환 약물 인 클로로퀸은 최근 잠재적 인 광범위한 스펙트럼 항 바이러스 약물로보고되었습니다. 8 , 9 클로로퀸은 증가 엔도 바이러스 / 세포 융합에 필요한 산도뿐만 아니라 SARS-COV의 세포 수용체의 글리코 실화 방해함으로써 블록 바이러스 감염에 공지되어있다. 10 세이 그 클로로퀸 두 항목에 작용 입증하고 베로 E6 세포에서 2019-nCoV 감염 후 입력 단계 (도.에서 시간 형 또한 우리 1C, D). 클로로퀸은 항 바이러스 활성 외에도 면역 조절 활성을 가지고있어 생체 내에서 항 바이러스 효과를 상승적으로 향상시킬 수 있습니다. 클로로퀸은 경구 투여 후 폐를 포함한 전신에 널리 분포되어 있습니다. Vero E6 세포에서 2019-nCoV에 대한 클로로퀸 의 EC 90 값은 6.90 μM이며, 이는 500 mg 투여를받은 류마티스 관절염 환자의 혈장에서 입증 된 바와 같이 임상 적으로 달성 될 수있다. 11 클로로퀸은 70 년 이상 사용 되어온 값 싸고 안전한 약물이므로 2019-nCoV에 임상 적으로 적용될 수 있습니다.

우리의 연구 결과 remdesivir 및 chloroquine 생체 외에서 2019-nCoV 감염의 제어에 매우 효과적입니다. 이들 화합물은 안전성 추적 기록을 가진 인간 환자에서 사용되고 다양한 질환에 대해 효과적인 것으로 나타났기 때문에, 신규 코로나 바이러스 질환으로 고통받는 인간 환자에서 평가되어야한다고 제안한다.

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감사의 말
이 연구에 필수적인 도움을 주신 Xi Virology Institute의 Xi Wang, Yan Wu, Weijuan Shang, Huanyu Zhang, Yufeng Li, Hengrui Hu, Xiaming Jiang, Yuan Sun에게 감사드립니다. 국립 바이러스 자원 센터의 Fei Deng 교수와 무한 바이러스 연구소의 BSL-3 연구소의 Tao Du, Jia Wu 및 Hao Tang에게 중요한 지원에 감사드립니다. Yanyi Wang 교수와 Wuhan Virology Institute 및 Wuhan National Biosafety Laboratory의 동료들에게 훌륭한 협조에 감사드립니다. 원고의 과학적 편집에 대해 Basil Arif 박사에게 감사드립니다. 익명의 검토 자에게 소중한 제안에 감사드립니다. 이 작업은“주요 신약 혁신 및 개발”(송리 교수의 지시) (2018ZX09711003)에 대한 국가 과학 및 기술 주요 프로젝트의 보조금에 의해 부분적으로 지원되었습니다.

작가 정보
저자 노트

1. 이 저자들은 Manli Wang, Ruiyuan Cao, Leike Zhang, Xinglou Yang과 똑같이 기여했습니다.
   

소속

1. 중국 과학 아카데미 생물 안전 메가 사이언스 센터, 우한 바이러스 연구소, 국립 키 바이러스 연구소, 중국 우한 430071
   • 맨리 왕
   • Leike Zhang
   • 양 싱루
   • 지아 리우
   • 민규에
   • heng 리시
   • 지홍 후
   • & Gengfu Xiao
2. 베이징 약리학 독성 연구소, 응급 약물 국가 공학 연구소, 100850, 베이징, 중국
   • 루이 위안 카오
   • & 우종

기여
GX, WZ, ZH, MW, RC 및 LZ는 실험을 고안하고 설계했습니다. XY, JL, MX, MW, RC 및 LZ는 여러 실험에 참여했습니다. GX, WZ, ZH, ZS, MW, RC 및 LZ가 데이터를 분석했습니다. MW, LZ, RC 및 ZH는 원고를 작성했습니다. GX, WZ 및 ZH는 원고의 최종 승인을 제공했습니다.

해당 저자
에 대응 Zhihong 후 또는 우 종 또는 Gengfu 샤오 .

윤리 선언
경쟁 관심
저자는 경쟁 관계를 선언하지 않습니다.

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